Введение
В условиях пандемии ожирения изучение мер прогнозирования и профилактики ассоциированных с ним осложнений беременности приобретает не только медицинский, но и демографический характер [1]. За последние 5 лет в России отмечено снижение суммарного коэффициента рождаемости: с 1,47 в 2018 г. до 1,41 в 2023 г. [2]. В то же время средний возраст рожениц в стране составил 29,8 года, согласно данным за первое полугодие 2025 г. [3]. Ожирение осложняет течение беременности и родов в 45-85% случаев, увеличивая риск мертворождения, гестационного сахарного диабета, тромбоэмболических осложнений, преэклампсии (ПЭ) [4]. По данным Всемирной организации здравоохранения (2020), каждый 4-й случай материнской смертности ассоциирован с ПЭ [5]. Комбинированный пренатальный скрининг в I триместре беременности позволяет выделить группы риска по ее развитию, однако на прегравидарном этапе отсутствуют информативные маркеры заболевания.
Исследователи уделяют особое внимание генетическим детерминантам ПЭ. Выделяют несколько генов, предположительно связанных с ПЭ: локусы rs9340799 и rs3798577 гена ESR1, полиморфизмы I/D гена ангиотензин-превращающего фермента (ACE), аллель Т гена алипопротеина Е (ApoЕ) rs429358, аллель G гена СЕТР rs708272 [6-8].
Ген ESR1 кодирует α-рецепторы эстрогенов, встречается в структуре ДНК клеток мышечной ткани, адипоцитов, яичников, стволовых клеток, головного мозга [6]. Ген ACE кодирует ангиотензин-превращающий фермент, имеющий ключевое значение в регуляции периферической гемодинамики, отвечая за конверсию ангиотензина-1 в ангиотензин-2 [7]. Ген СЕТР кодирует белок - переносчик эфиров холестерина, регулируя обмен липидов между липопротеидами высокой и низкой плотности [8].
Среди возможных биохимических маркеров высокого риска ПЭ выделяют повышенный уровень липопротеинов очень низкой плотности, коэффициент атерогенности более 3,5 [8].
Однако следует отметить, что все вышеперечисленное справедливо для общей когорты пациенток с ПЭ, вопрос предикторов ПЭ при ожирении не изучен. Необходимость поиска новых маркеров ранней диагностики и прогнозирования ПЭ при ожирении обусловила актуальность и цель данного исследования.
Цель исследования - повысить эффективность прогнозирования преэклампсии у женщин с ожирением.
Материал и методы
Проведено проспективное когортное исследование на клинической базе кафедры акушерства и гинекологии с курсом перинатологии Медицинского института РУДН им. Патриса Лумумбы - родильном доме при ГБУЗ ГКБ № 29 им. Н.Э. Баумана ДЗМ.
Критерии включения в исследование: репродуктивный возраст, срок беременности 22,0-41,6 нед, одноплодная беременность, подписанное добровольное информированное согласие пациентки. Критерии исключения: многоплодная беременность; беременность, наступившая путем использования вспомогательных репродуктивных технологий; отказ пациентки от участия в исследовании; срок беременности меньше 22 нед, наличие артериальной гипертензии в анамнезе.
Диагноз "ожирение" выставляли по результатам расчета индекса массы тела (ИМТ) ≥30,0 кг/м2 [9]. В исследовании приняли участие 168 беременных с ожирением, которые были стратифицированы на 2 группы: в 1-ю вошли пациентки с ожирением и ПЭ (n=100), во 2-ю ‒ 68 женщин с ожирением без ПЭ, родившие в период с I квартала 2024 г. по I квартал 2025 г. в доношенном сроке беременности (37,0-41,0 нед). Диагноз "преэклампсия" был выставлен на основании критериев, соответствующих клиническим рекомендациям ("Преэклампсия. Эклампсия. Отеки, протеинурия и гипертензивные расстройства во время беременности, в родах и послеродовом периоде", 2024). Исследование одобрено этическим комитетом РУДН им. Патриса Лумумбы от 18 октября 2018 г., протокол № 2.
У всех участниц исследования при поступлении в стационар в сроках 37,0-41,0 нед гестации после подписания информированного согласия проводили забор венозной крови из локтевой вены в вакуумные пластиковые пробирки объемом 5 мл. Проводили центрифугирование полученных образцов с целью разделения сыворотки крови и ее компонентов.
Методом ПЦР-секвенирования определяли наличие следующих полиморфизмов: гена D2-рецептора дофамина - DRD2/ANKK1 TaqIA (SNP rs1800497), гена белка PGC-1A - SNP PGC-1A rs8192678 и I/D гена ACE. Для исследования использовали лейкоциты периферической крови, полученные после предварительного центрифугирования цельной крови в течение 10 мин при относительной центробежной силе 1100 g на скорости 3000 об/мин. Плазму и компоненты крови после центрифугирования размещали в разные пробирки.
Масс-спектрометрическое исследование протеома сывороток крови проводили на аппарате GSQ-5100 (Health Genetec, США). С помощью автоматизированной системы подсчета частиц масс-спектрометра осуществляли детекцию молекул, определяли коэффициент спектральной распространенности для каждого белка (Normalised Spectral Adundance Factor, NSAF).
Статистическую обработку материала осуществляли в программе Statistica v.12 (StatSoft Inc, США). Использовали принцип/закон равновесия Харди-Вайнберга для проверки распределения частот генотипов по исследуемым локусам. Статистическую значимость различий для количественных признаков рассчитывали с применением критерия χ2 Пирсона. Для статистически значимых признаков определяли отношения шансов (ОШ) и 95% доверительные интервалы (ДИ). Значение p<0,05 считалось статистически значимым. Для изучения силы связи между двумя признаками использовали метод ранговой корреляции Спирмена.
Результаты и обсуждение
При исследовании полиморфизма гена DRD2/ANKK1 TaqIA (SNP rs1800497), с учетом равновесия Хайди-Вайнберга, обнаружены достоверно значимые различия между группами в распространенности варианта C/C (табл. 1). У беременных с ожирением и ПЭ он встречался в 4,5 раза чаще, чем у пациенток 2-й группы (p<0,001).
)
Ген дофаминовых рецепторов DRD2 кодирует рецептор, который связывает дофамин как в органах центральной нервной системы (базальных ганглиях, гипофизе), так и в периферических органах (надпочечниках, почках, кишечнике) и опосредует действие дофамина в когнитивных процессах, эмоциональной обработке информации, а также ингибировании и стимуляции секреции пролактина [10]. F. Aliasghari и соавт. (2021) установили, что полиморфизмы гена DRD2/ANKK1 чаще встречаются у людей с ожирением в сравнении с пациентами с нормальным ИМТ [11]. Таким образом, полученные нами результаты в некоторой степени созвучны с данными научной литературы. Носительство полиморфизмов гена DRD2 ассоциировано не только с ожирением, но и риском ПЭ.
Анализ распределения частот генотипов и аллелей гена SNP PGC-1A rs8192678 с учетом равновесия Хайди-Вайнберга представлен в табл. 2. У пациенток с ожирением и ПЭ гомозиготный вариант Ser/Ser встречался в 3,9 раза чаще (р=0,005) в сравнении с пациентками с ожирением. Носительницами гетерозиготного варианта Gly/Ser в 1,8 раза чаще являлись пациентки с ожирением и ПЭ (р<0,001).
)
Ген PGC-1A регулирует экспрессию белков - коактиваторов транскрипции, участвующих в энергетическом метаболизме, концентрация которых наиболее высока в жировой ткани, скелетной мускулатуре, печени и головном мозге. В жировой ткани он способствует запуску окислительного фосфорилирования в митохондриях и высвобождению энергии аденозинтрифосфата [12]. Однако известно, что мутации, полиморфизмы данного гена нарушают обменные процессы в митохондриях, увеличивая резистентность к инсулину [12, 13]. Полученные нами данные согласуются с результатами О.В. Папышевой и соавт. (2020): полиморфизм Ser/Ser гена PGC-1A увеличивает риск развития ПЭ в 1,8 раза [13].
Результаты изучения распространенности частот аллелей и генотипов полиморфизма I/D гена ACE представлены в табл. 3.
У беременных с ожирением и ПЭ вариант I/I встречался в 2,5 раза чаще, чем у пациенток 2-й группы (p=0,003).
В литературе встречаются исследования связи полиморфизмов гена ACE с ПЭ. По данным Е.В. Тимохиной и соавт. (2019), риск развития ранней ПЭ при носительстве аллеля D увеличивался в 5,1 раза, а полиморфизм I/D ассоциирован с высоким риском поздней ПЭ [14]. Ранее И.П. Халфорд-Князева и соавт. (2013) показали, что генотип I/D гена ACE - фактор риска развития ПЭ [7]. Интересные данные получены Md.B. Hosen и соавт. (2021): у беременных с генотипом D/D риск развития ПЭ был в 3,43 раза выше в сравнении с женщинами с генотипами I/D или I/I [15].
После молекулярно-генетического исследования мы провели масс-спектрометрический анализ сывороток крови у женщин с ожирением и ожирением и ПЭ. По результатам жидкостной хроматографии выделено 8 белков, общих для протеома обеих групп исследования: свободные κ-цепи иммуноглобулинов 2D-28, легкие цепи иммуноглобулина κ 3-9, кератин цитоскелета II типа, гелсолин, тромбоспондин-1, цинк-α-2-гликопротеин, люмикан, алипопротеин C-IV.
С целью выявления протеинов, специфичных для ПЭ, при помощи масс-спектрометра определены разницы в концентрациях выявленных белков между двумя группами. В результате проведенного анализа в группе пациенток с ожирением и ПЭ обнаружены молекулы, коэффициент спектральной распространенности которых был в 2 раза и более выше в сравнении с таковым в группе женщин с ожирением (табл. 4).
)
Таким образом, протеомный спектр пациенток с ПЭ и ожирением характеризуется повышением в 2 раза и более концентраций следующих белков: свободные κ-цепи иммуноглобулинов 2D-28, цинк-α-2-гликопротеин, люмикан, алипопротеин C-IV. Достоверно значимые различия в концентрации между двумя группами зарегистрированы лишь для цинк-α-2-гликопротеина (p=0,01).
Определение связи выявленных полиморфизмов генов с высокой концентрацией в сыворотке крови цинк-α-2-гликопротеина у беременных с ожирением и ПЭ осуществляли с помощью метода ранговой корреляции Спирмена (табл. 5).
)
Корреляционный анализ выявил наличие прямой положительной связи между носительством полиморфизма I/I гена ACE и высоким уровнем цинк-α-2-гликопротеина у беременных с ПЭ и ожирением.
Полученные результаты схожи с данными Н.М. Зокировой (2024), обнаружившей статистические значимое повышение уровня цинк-α-2-гликопротеина в сыворотке крови у женщин с ожирением и ПЭ в сравнении с соматически здоровыми нормовесными беременными [9, 16].
Заключение
В результате выполненного исследования выявлены генетические детерминанты ПЭ у женщин с ожирением: полиморфизм C/C гена DRD2/ANKK1 TaqIA (SNP rs1800497), полиморфизм Ser/Ser гена SNP PGC-1A rs8192678, полиморфизм Gly/Ser гена SNP PGC-1A rs8192678, полиморфизм I/I гена ACE. Идентифицирован биохимический маркер, цинк-α-2-гликопротеин, повышение концентрации в сыворотке крови которого >2,452 ассоциировано с высоким риском ПЭ при ожирении. Выявленная прямая корреляционная связь между высоким уровнем цинк-α-2-гликопротеина и носительством полиморфизма I/I гена ACE, что позволяет идентифицировать указанные биомаркеры как ранние предикторы ПЭ у женщин с ожирением. Выявление носительства полиморфизмов генов DRD2/ANKK1 TaqIA (SNP rs1800497), PGC-1A rs8192678, ACE, а также определение концентрации цинк-α-2-гликопротеина в сыворотке крови на прегравидарном этапе позволит выделять женщин с ожирением в группу высокого риска ПЭ и осуществлять своевременную профилактику заболевания.