Таксономический профиль микробиома эндометрия при хроническом эндометрите

Резюме

Цель исследования - определить таксономический профиль микробиома эндометрия при хроническом эндометрите и выявить наиболее значимые сочетания различных инфекций.

Дизайн: наблюдательное, когортное, закрытое исследование.

Материал и методы. Обследованы 88 пациенток репродуктивного возраста с бесплодием: I группа (n=56) - пациентки с бесплодием на фоне хронического эндометрита, II группа (n=32) - пациентки без хронического эндометрита. Обследование включало анамнестические данные, жалобы пациенток, гинекологический статус, комплексное микробиологическое исследование микробиома, вирома эндометрия и отделяемого влагалища.

Результаты. Значимая разница видового состава в микробиоме эндометрия между обследуемыми группами отсутствовала, а степень обсемененности у большинства пациенток не превышала 104 ГЭ/мл. Герпесвирусы были представлены вирусом простого герпеса и цитомегаловирусом, и в I группе встречались значительно чаще (у 19,64% пациенток), чем во II группе (у 9,38% пациенток). Сравнительная характеристика видового состава микробиома эндометрия и влагалища показала, что в биоптатах эндометрия степень обсемененности была ниже и в большинстве своем не превышала 104, тогда как во влагалище титр составлял 107-108, при этом видовой состав практически не имел отличий. Однако у некоторых пациенток в биоптатах эндометрия были выявлены Ureaplasma urealiticum, Mycoplasma hominis, которые отсутствовали во влагалище.

Заключение. Микробиом эндометрия представлен условно-патогенной флорой: Enterobacteriaceae spp., Streptococcus spp., Gardnerella vaginalis, Ureaplasma spp. с низкой степенью обсемененности, при этом у пациенток с хроническим эндометритом Lactobacillus spp. в полости матки выявлялись в 3 раза реже.

Ключевые слова:микробиом эндометрия; герпесвирусы; хронический эндометрит; бесплодие

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Вклад авторов. Разработка концепции (формирование идеи, формулировка и развитие ключевых целей и задач; проведение исследования), анализ и интерпретация полученных данных - Карахалис Л.Ю., Кононенко Т.С.; подготовка и редактирование текста - критический пересмотр рукописи с внесением ценного замечания интеллектуального содержания - Карахалис Л.Ю.; подготовка и редактирование текста (составление черновика рукописи; участие в научном дизайне) - Кононенко Т.С.; разработка методологии - Карахалис Л.Ю., Кононенко Т.С.; утверждение окончательного варианта статьи, принятие ответственности за все аспекты работы, целостность всех частей статьи и ее окончательный вариант - Карахалис Л.Ю., Кононенко Т.С.

Для цитирования: Карахалис Л.Ю., Кононенко Т.С. Таксономический профиль микробиома эндометрия при хроническом эндометрите // Акушерство и гинекология: новости, мнения, обучение. 2022. Т. 10, № 4. С. 23-30. DOI: https://doi.org/10.33029/2303-9698-2022-10-4-23-30

Взаимосвязь хронического эндометрита (ХЭ) с бесплодием стала важной клинической проблемой, у 2,8- 56,8% бесплодных женщин и у 9,3-67,6% женщин с невынашиванием беременности диагностируется ХЭ [1-4]. Хронический эндометрит часто протекает латентно или имеет неспецифические симптомы (тянущая боль внизу живота, аномальное маточное кровотечение, межменструальные кровомазанья, диспареуния, патологические выделения из влагалища, рецидивирующий цистит). Единственным симптомом ХЭ может являться нарушение репродуктивной функции в виде бесплодия и неэффективности циклов экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) [5-10]. Согласно результатам проспективного исследования Cicinelli, опубликованного в международном журнале Fertility and Sterility с анализом проведенных более 2000 офисных гистероскопий, обнаружено, что распространенность ХЭ составляет 20%, при этом у 37% пациенток имелось бесплодие [13].

Одним из основных факторов развития эндометриальной дисфункции является бактериальная и вирусная инвазия. Chlamydia trachomatis и Neiseria gonorrhoeae можно считать основными патогенными микроорганизмами. Тем не менее у пациенток с ХЭ сообщалось о более низком уровне обнаружения этих бактерий [11-15]. В современных условиях ХЭ характеризуется увеличением значимости условно-патогенной флоры и вирусной инфекции [16, 17]. Исследования также показали, что микробиомы полости матки и влагалища различаются.

Важно подчеркнуть, что различия между флорой эндометрия и влагалища наблюдались независимо от метода сбора образцов, выполненного трансцервикально или при операции на матке, это подтверждает существование микробиома эндометрия, при этом цервикальный канал - безопасный путь для взятия проб из полости матки для анализа микробиома [18-21]. В полости матки при ХЭ могут присутствовать такие бактерии, как Streptococcus spp., Enterobacteriaceae spp., Staphylococcus spp., Gardnerella vaginalis, Mycoplasma spp. и Ureaplasma spp. Хотя сообщалось, что Herpes simplex virus и Cytomegalovirus могут вызывать эндометрит [22, 23], связь между вирусной инфекцией и возникновением ХЭ остается недостаточно изученной.

Цель - определить таксономический профиль микробиома эндометрия при ХЭ и выявить наиболее значимые сочетания различных инфекций.

Материал и методы

Нами обследованы 88 пациенток репродуктивного возраста, проходивших лечение бесплодия в Краевом центре охраны здоровья семьи и репродукции. Были сформированы 2 группы пациенток: I группа (n=56) включала пациенток с бесплодием на фоне ХЭ; II группа (n=32) - контрольная, включала пациенток без ХЭ с бесплодием по мужскому фактору.

Критерии включения: возраст пациенток 18-45 лет; бесплодие; овуляторный менструальный цикл; морфологически верифицированный ХЭ (для пациенток I группы); отсутствие гинекологической патологии невоспалительного генеза; согласие на участие в исследовании; отсутствие других причин, которые, по мнению исследователей, могли бы помешать диагностике.

Критерии невключения: возраст до 18 и старше 45 лет; злокачественные новообразования любой локализации; инфицирование вирусом иммунодефицита, гепатитами В, С; аутоиммунные заболевания и повышенный аллергический статус; тяжелые экстрагенитальные заболевания.

Всем пациенткам было проведено комплексное обследование, которое включало общий и гинекологический анамнез, гинекологическое обследование. Морфофункциональное состояние оценивалось по результатам гистологического и иммуногистохимического (ИГХ) исследования эндометрия, взятого путем пайпель-биопсии на 7-11-й день менструального цикла в среднюю и позднюю фазы пролиферации. Для исключения контаминации биоптата эндометрия микрофлорой влагалища и цервикального канала под визуальным контролем вводили прозрачный катетер диаметром 3 мм, через который при помощи аспирационной пайпель-кюретки получали материал из полости матки. Исследование пайпель-биоптата эндометрия проводилось культуральным и методом полимеразно-цепной (ПЦР) реакции для установления таксономического профиля условно-патогенной флоры, инфекций, передаваемых половым путем (ИППП), вируса простого герпеса и цитомегаловируса.

Исследование микробиоценоза влагалища включало микроскопию влагалищных мазков и ПЦР-исследование. У всех пациенток I группы ХЭ подтвержден результатами гистологического и ИГХ-исследований биоптата эндометрия, тогда как во II группе ХЭ отсутствовал.

Полученные данные были обработаны с помощью пакета прикладных программ Microsoft Excel (2010), Statistica 13.3 (USA, Tibco). Проводились следующие этапы статистической обработки полученных данных: математическое и статистическое описание исследуемых объектов, оценка значимости выявленных различий по средним значениям и частоты проявления признаков в обозначенных группах, а также выявление связей изучаемых признаков. Оценка среднего проводилась с использованием среднего арифметического, медианы, моды. Применяли методику двухмерного частотного анализа таблицы сопряженности, непараметрические методы сравнения средних по Вальду-Вольфовицу и Манну-Уитни. Статистическую значимость результатов оценивали после проведенной математической обработки и считали статистически достоверными при уровне р=0,000/р<0,05 [24].

Результаты

Средний возраст в I группе составил 34,86±4,66 года (Me=35,50); во II группе - 30,22±5,22 года (Me=29,50). Группы сопоставимы по возрасту, росту, массе тела, индексу массы тела (ИМТ), а также менструальной функции. Длительность бесплодия в I группе была 7,36±4,79 года (Me=6,00), а во II группе - 2,94±1,27 года (Me=2,50), при этом средняя продолжительность ХЭ в I группе составила 4 года, р=0,000 (рис. 1).

Анализ количества неудачных попыток экстракорпорального оплодотворения (ЭКО), приходящихся на 1 пациентку, показал: в I группе число попыток составило 1,89±1,94 (Me=2,00), во II группе - 0,75±1,19 (Me=0,00), р=0,001 (рис. 2).

Наиболее частыми жалобами среди пациенток с ХЭ, составляющих I группу, были болезненные [у 41 (73,21%) пациентки] и обильные [у 27 (48,21%) пациенток] менструации, а также межменструальные кровянистые выделения [у 24 (42,86%) пациенток]. 2 жалобы и более предъявляли 35 (62,50%) пациенток I группы, тогда как у 23 (71,88%) пациенток II группы жалобы вовсе отсутствовали (рис. 3).

Среди сопутствующей гинекологической патологии значимо чаще встречались воспаления маточных труб [у 40 (71,43%) пациенток], цервициты [у 25 (44,64%) пациенток], мастопатии [у 30 (53,57%) пациенток] и полипы эндометрия [у 18 (32,14%) пациенток]. Достоверных отличий по частоте перенесенных ИППП выявлено не было, а частота генитального герпеса в I группе составила 37,5% (21 пациентка), в отличие от 15,63% (5 пациенток) II группы, р<0,05 (рис. 4).

По результатам микроскопии урогенитальных мазков получены следующие данные: нормоценоз у 31 (55,36%) пациентки I группы и у 23 (71,88%) пациенток II группы; промежуточный тип мазка соответственно у 10 (17,86%) и 3 (9,38%) пациенток, при этом бактериальный вагиноз был у 7 (12,50%) пациенток I группы и у 2 (6,25%) пациенток II группы, а неспецифический вагинит у 8 (14,29%) пациенток I группы и у 4 (12,50%) пациенток II группы (табл. 1).

Полученные данные свидетельствуют о приваривании нормоценоза в обеих группах без статистической разницы, p=0,126. Между другими показателями мазка также не выявлена статистическая разница.

Культуральное исследование биоптатов эндометрия на условно-патогенную флору показало, что стерильные образцы были у 38 (67,86%) пациенток I группы и у 16 (50,00%) пациенток II группы. При этом нами отмечено, что Lactobacillus spp. дали рост у 10 (17,86%) пациенток I группы и у 13 (40,63%) пациенток II группы (p<0,05). Степень обсемененности биоптатов в I группе составила 3,79×104± 1,87×105 КОЕ/мл (Me=0,00), во II группе - 9,85×104± 2,95×105 КОЕ/мл (Me=0,00), p<0,05. Условно-патогенная флора в обеих группах была представлена Enterobacteriaceae spp., Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Gardne- rella vaginalis, Ureaplasma spp., Mycoplasma hominis, Candida albicans, без достоверных отличий в видовом составе и частоте обнаружения (р>0,05). Концентрация условно-патогенной флоры варьировала от 102 до 105 КОЕ/мл и в большинстве своем не превышала клинически значимые нормы (103 КОЕ/мл).

ПЦР-исследование отделяемого влагалища и биоптатов полости матки показало отсутствие ИППП в обеих группах (рис. 5).

У пациенток с хроническим эндометритом Lactobacillus spp. в полости матки выявлялись в 3 раза реже. Значимая разница в видовом составе и частоте выявления условно-патогенной флоры при ПЦР-исследовании также отсутствовала, а степень обсемененности в среднем составила 104 ГЭ/мл (табл. 2).

Герпесвирусы в I группе встречались значительно чаще (у 19,64%), чем во II группе (у 9,38%), p<0,05 (рис. 5). При этом в I группе были выявлены более высокие значения колониеобразующих единиц Lactobacillus spp., Enterobacteriaceae spp., Streptococcus spp., Gardnerella vaginalis, Ureaplasma spp. и Herpes simplex virus (табл. 2).

В составе микробиома влагалища у всех пациенток доминировали Lactobacillus spp. в высоком титре (107- 108 ГЭ/мл). У пациенток I группы значимо чаще встречались факультативно-анаэробная условно-патогенная флора кишечной группы (48,15%), стафилококки (42,59%), стрептококки (29,09%), представленные в низком титре (103 ГЭ/мл). Ureaplasma parvum и Mycoplasma hominis были выявлены только у пациенток I группы (21,43 и 5,36% соответственно), а титр не превышал 103 ГЭ/мл. Gardnerella vaginalis, Atopobium vaginae и Candida albicans встречались одинаково часто в обеих группах в клинически значимых титрах (103-106 ГЭ/мл). Виром был представлен герпесвирусами в I и II группах с наиболее частым выявлением их у пациенток с ХЭ, при этом титр не превышал 104 ГЭ/мл (рис. 6).

Сравнительная характеристика видового состава микробиома эндометрия и влагалища в обследуемых группах показала, что в биоптатах эндометрия степень обсемененности была ниже (102-106 ГЭ/мл), чем во влагалище (107- 108 ГЭ/мл), при этом видовой состав практически не имел отличий (рис. 7).

Однако у некоторых пациенток в биоптатах эндометрия были выявлены Ureaplasma urealiticum, Mycoplasma hominis, которые отсутствовали во влагалище (см. рис. 7).

Заключение

Оценка клинико-анамнестических данных показала: пациентки с ХЭ предъявляли жалобы в 3 раза чаще на болезненные, обильные менструации и межменструальные кровянистые выделения. Длительность бесплодия в I группе была в 2,5 раза выше, чем во II (р=0,000), как и количество неудачных попыток ЭКО.

По результатам микроскопии влагалищных мазков значимых отличий не было (р>0,05), что можно объяснить низкой специфичностью данного исследования.

При культуральном исследовании биоптатов эндометрия у пациенток с ХЭ колонизация Lactobacillus spp. была достоверно реже (17,86%), по сравнению с колонизационной резистентностью у обследуемых без ХЭ (40,63%), p<0,05, при этом степень обсемененности имела схожие значения (104 КОЕ/мл).

Микробиом эндометрия представлен условно-патогенной флорой: Enterobacteriaceae spp., Streptococcus spp., Gardnerella vaginalis, Ureaplasma spp. с низкой степенью обсемененности, при этом у пациенток с ХЭ Lactobacillus spp. в эндометрии выявлялись в 3 раза реже.

ЛИТЕРАТУРА

1.Kimura F., Takebayashi A., Ishida M., Nakamura A., Kitazawa J., Morimune A. et al. Review. Chronic endometritis and its effect on reproduction // J. Obstet. Gynaecol. Res. 2019. Vol. 45. P. 951-960. DOI: https://doi.org/10.1111/jog.13937

2. Атанесян Э.Г., Пенжоян Г.А., Андреева М.Д. и др. Роль вирусной инфекции у женщин с хроническим воспалительным процессом в эндометрии // Российский вестник акушера-гинеколога. 2018. Т. 18, № 2. С. 104-106. DOI: https://doi.org/10.17116/rosakush2018182104-106

3. Баранов И.И., Кукарская И.И., Карахалис Л.Ю. и др. Комплексный подход к лечению больных с воспалительными заболеваниями органов малого таза // Акушерство и гинекология: новости, мнения, обучение. 2018. № 4 (22). С. 65-71. DOI https://doi.org/10.24411/2303-9698-2018-14008

4.Chen C., Song X., Wei W., Zhong H., Dai J., Lan Z. et al. The microbiota continuum along the female reproductive tract and its relation to uterine-related diseases // Nat. Commun. 2017. Vol. 8. P. 875.

5.Puente E., Alonso L., Laganà A.S., Ghezzi F., Casarin J., Carugno J. Chronic endometritis: old problem, novel insights and future challenges // Int. J. Fertil. Steril. 2020. Vol. 13, N 4. P. 250-256. DOI: https://doi.org/10.22074/ijfs.2020.5779

6.Franasiak J.M., Werner M.D., Juneau C.R., Tao X., Landis J., Zhan Y. et al. Endometrial microbiome at the time of embryo transfer: next-generation sequencing of the 16S ribosomal subunit // J. Assist. Reprod. Genet. 2016. Vol. 33. P. 129-136. DOI: https://doi.org/10.1007/s10815-015-0614-z

7. Авдеева М.Г., Кончакова А.А., Котова Н.В. и др. Оппортунистические инфекции и иммунологический дефицит у женщин с неэффективными циклами ЭКО // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2017. Т. 22, № 4. С. 183-189. DOI https://doi.org/10.18821/1560-9529-2017-22-4-183-189

8. Карахалис Л.Ю., Пономарева Ю.С., Петренко В.С. и др. Коррекция микробиоты влагалища при сочетанной патологии // Акушерство и гинекология. 2020. № 12. С. 177-184. DOI: https://doi.org/10.18565/aig.2020.12.177-184

9. Урюпина К.В., Куценко И.И., Кравцова Е.И. и др. Эндометриальный фактор бесплодия у пациенток позднего репродуктивного возраста (обзор) // Кубанский научный медицинский вестник. 2020. Т. 27, № 6. С. 149-163. DOI: https://doi.org/10.25207/1608-6228-2020-27-6-149-163

10.Inmaculada M., Cicinelli E. et al. The diagnosis of chronic endometritis in infertile asymptomatic women: a comparative study of histology, microbial cultures, hysteroscopy, and molecular microbiology // Am. J. Obstet. Gynecol. 2018. Vol. 218, N 6. P. 602.

11.Moreno I., Cicinelli E., Garcia-Grau I. et al. The diagnosis of chronic endometritis in infertile asymptomatic women: a comparative study of histology, microbial cultures, hysteroscopy, and molecular microbiology // Am. J. Obstet. Gynecol. 2018. Vol. 218. P. 602-616.

12.Kim D., Hofstaedter C.E., Zhao C., Mattei L., Tanes C., Clarke E. et al. Optimizing methods and dodging pitfalls in microbiome research // Microbiome. 2017. Vol. 5. P. 52. DOI: https://doi.org/10.1186/s40168-017-0267-5

13.Miles S.M., Hardy B.L., Merrell D.S. Investigation of the microbiota of the reproductive tract in women undergoing a total hysterectomy and bilateral salpingo-oopherectomy // Fertil. Steril. 2017. Vol. 107. P. 813-820. DOI: https://doi.org/10.1016/j.fertnstert.2016.11.028

14. Атанесян Э.Г., Пенжоян Г.А., Андреева М.Д., Хачак С.Н. Клиническое наблюдение прегравидарной подготовки и исхода родов у пациентки с рецидивирующей патологией эндометрия на фоне хронического эндометрита вирусной этиологии // Российский вестник акушера-гинеколога. 2019. Т. 19, № 6. С. 65-68. DOI: https://doi.org/10.17116/rosakush20191906165

15.Moreno I., Simon C. Relevance of assessing the uterine microbiota in infertility // Fertil. Steril. 2018. Vol. 110. P. 337-343. DOI: https://doi.org/10.1016/j.fertnstert.2018.04.041

16. Карахалис Л.Ю., Пенжоян Г.А., Пономарев В.В. и др. Противорецидивная терапия герпес-вирусной инфекции 2-го типа // Российский вестник акушера-гинеколога. 2017. Т. 17, № 4. С. 84-87. DOI: https://doi.org/10.17116/rosakush201717484-87

17.Mitchell C.M., Haick A., Nkwopara E., Garcia R., Rendi M., Agnew K. et al. Colonization of the upper genital tract by vaginal bacterial species in nonpregnant women // Am. J. Obstet. Gynecol. 2015. Vol. 212. P. 611.

18. Крутова В.А., Чулкова А.М., Ванян Д.Л. и др. Неоадъювантная диагностика и лечение хронического эндометрита // Кубанский научный медицинский вестник. 2018. Т. 25, № 1. С. 23-29.

19. Овчарук Э.А., Хабаров С.В., Хадарцева К.А. Локальное введение липосомальной эмульсии "Фламена" в лечении хронического эндометрита с аутоиммунной дезадаптацией // Вестник новых медицинских технологий. 2018. Т. 25, № 3. С. 87-95. DOI: https://doi.org/10.24411/1609-2163-2018-16234

20. Славинский А.А., Чуприненко Л.М., Веревкина В.С., Севостьянова Е.С. Нейтрофильные лейкоциты крови и клеточного инфильтрата в диагностике активности воспалительного процесса при хроническом эндометрите: проспективное нерандомизированное контролируемое исследование // Кубанский научный медицинский вестник. 2021. Т. 28, № 2. С. 59-72. DOI: https://doi.org/10.25207/1608-6228-2021-28-2-59-72

21. Карахалис Л.Ю., Филипович А.В., Халафян А.А. Оптимизация методов коррекции нарушений нормоценоза влагалища при первичном обращении пациенток // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2021. Т. 20, № 2. С. 50-57. DOI: https://doi.org/10.20953/1726-1678-2021-2-50-57

22.Liu Y., Chen X., Huang J. et al. Comparison of the prevalence of chronic endometritis as determined by means of different diagnostic methods in women with and without reproductive failure // Fertil. Steril. 2018. Vol. 109, N 5. P. 832-839. DOI: https://doi.org/10.1016/j.fertnstert.2018.01.022

23.Toson B., Simon C., Moreno I. The endometrial microbiome and its impact on human conception // Int. J. Mol. Sci. 2022. Vol. 23, N 1. P. 485. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms23010485

24. Халафян А.А. STATISTICA 6. Математическая статистика с элементами теории вероятностей. Москва : Бином, 2010. 492 с.

ГЛАВНЫЕ РЕДАКТОРЫ
ГЛАВНЫЙ РЕДАКТОР
Сухих Геннадий Тихонович
Академик РАН, доктор медицинских наук, профессор, директор ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова» Минздрава России
ГЛАВНЫЙ РЕДАКТОР
Радзинский Виктор Евсеевич
Член-корреспондент РАН, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой акушерства и гинекологии с курсом перинатологии медицинского факультета ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов»
Конгресс Право на жизнь
Вскрытие
Медицина сегодня
IX Междисциплинарная международная конференция: "Актуальные вопросы микрохирургии". Памяти Н.О. Миланова.

Приветствуем вас в новом 2023 году, который мы встретили с надеждой и неизменно с планами на будущее! Традиционно в феврале ученики Николая Олеговича Миланова, сотрудники основанной им кафедры в Сеченовском Университете, планируют проведение уже девятой мемориальной...

Тромботические проблемы при цереброваскулярной патологии и коморбидных процессах

Уважаемые коллеги! 10.02.2023 состоится Совместный научно-образовательный симпозиум Национальной Ассоциации по тромбозу и гемостазу и ФГБНУ "Научный центр неврологии" "Тромботические проблемы при цереброваскулярной патологии и коморбидных процессах". Начало регистрации в...

Приглашаем специалистов Сибирского федерального округа 9-10 февраля посетить Школу РОАГ!

Приглашаем специалистов Сибирского федерального округа 9-10 февраля посетить Школу РОАГ! Успешно продолжается образовательная работа общероссийского проекта "Школы РОАГ". Очередная встреча пройдет 9-10 февраля в онлайн-формате и объединит врачей Иркутска, Кемерово, а также...


Журналы «ГЭОТАР-Медиа»